EQUIPO 3 _TRANSFORMACIÓN BACTERIANA

La práctica de transformación bacteriana con pGLO a pesar de no ser la que correspondía a la práctica designada a ese día que era mini preparaciones de plásmidos, resultó de manera satisfactoria ya que gracias a la ayuda de una profesora de otro grupo que nos proporcionó el plásmido pudimos realizar esta práctica.

Durante el desarrollo de esta práctica tuvimos que descongelar las células en hielo durante unos 15 minutos (aprox.) alternando con el calor de las manos, aumentando la higiene en las manos para no contaminarlas, (lavando las manos antes de tomar las muestras y desinfectando la mesa de trabajo) cuando estas estuvieron listas, el profesor le agrego 10ng del plásmido proporcionado a la muestra etiquetada con pGLO + ya que la muestra de pGLO- es la muestra de control y ambos fueron mezclados por inversión y se les dejo en agua hielo durante 20 minutos y después se le dio un choque térmico por 45 segundos para después ser regresados al agua hielo 5 minutos. Con ayuda de una micro-pipeta el profesor agrego 900 µL del medio LB preparado por nosotros en la práctica anterior y fue incubado durante 40 minutos a 37°, después de esto fue centrifugado y retirado el sobrenadante para que quedara el “botón” con E-coli.
Se repartieron a todos los equipos los medios de cultivo preparados la sesión pasada para cultivar las muestras de pGLO + y pGLO – y ser observadas después de 36 horas bajo luz UV y luz blanca.

En si lo más “pesado” de esta práctica es la espera que se requiere en ciertos pasos y que contábamos con poco de este y por ese motivo en algunos de los pasos que requerían tiempo se tuvo que reducir 10 o 20 minutos.

En los medios de cultivo sembrados con E- coli se presentarón los siguientes resultados:

Medio pGLO Resultado Luminiscencia

LB* y Ampicilina + Crecimiento de colonias No
LB* - Crecimiento de colonias No
LB, Ampicilina y
arabinosa + Crecimiento de colonias Si
LB* y Ampicilina - Crecimiento de colonias No
LB* - Crecimiento de colonias No
LB, Ampicilina y
Arabinosa + Crecimiento de colonias Si