Equipo 3- Práctica 6 "Preparación de medios de cultivo para Escherichia coli y propagación de E.coli transformada con pGLO

Durante esta práctica no hubo problema alguno durante su desarrollo ya que constaba de unos ajustes en cuanto a los cálculos para hacer el medio de cultivo LB líquido , ya que en lugar de usar los 750 mL solo usamos 100 mL. Lo único que demoró un poco la práctica es que solo una balanza analítica servía y todos lo equipos teníamos que hacer uso de ella.
Nosotros preparamos nuestro medio de cultivo de una manera rápida y eficaz puesto como ya lo mencionamos los cálculos fueron muy sencillos y solo constaba de pesar y mezclar con los 100 mL de agua desionizada, al momento de meter a esterilizar el medio de cultivo dividimos nuestros 100 mL en dos matraces de 125 mL con 50 mL cada uno. Además de esto pusimos agua desionizada a esterilizar junto con todos los medios de cultivo. Y así fue como concluimos satisfactoriamente nuestra práctica y gracias a la ayuda del profesor que de buena manera se ofreció a guardar nuestro medio de cultivo sin tener que, alguien del equipo a esperar a que saliera del autoclave ya que era lo único que nos faltaba para concluir.

Equipo 3-Prática 5 "Cinética Enzimática"

Durante el desarrollo de esta práctica nos dimos cuenta de que cuando la concentración de sustrato varía la reacción se ve afectada, entre menos concentración es más lenta y entre mayor concentración más rápida.

Al introducir los tubos en el espectro fotómetro pensamos que los valores tenían que resultar de una forma
consecutiva, es decir, ir aumentando hasta que se llegará a un valor en el cual ya no aumentara (valor máximo) y que no disminuyera, pero al momento de realizar las lecturas nos percatamos de que era así y por ende los valores y la gráfica debían de salir correctamente aunado a todos los cálculos posteriores que hicimos.

Sin embargo, en un principio, tuvimos problemas con el espectro fotómetro, ya que el primero que se nos asignó no servía, nos proporcionaron otro para trabajar y había que calibrarlo con el tubo uno, entonces, comenzamos a realizar las lecturas, pero no nos percatamos que teníamos que agitarlo así que al inicio, los valores que obteníamos, salían bajos, luego aumentaban y después disminuían. Dándonos cuenta de esto volvimos a leer la práctica para ver si algo había fallado y nos dimos cuenta de que nos faltaba agitarlo. Después de que los valores nos volvieron a salir mal, vimos si había que calibrarlo de nuevo, y resultó ser que en efecto,que estaba des calibrado, pero durante este el proceso de calibración, una compañera tiró accidental mente parte de la solución y tuvimos que volver a hacerla para calibrarlo, entonces, los valores volvieron a salir como esperábamos.

Equipo 3 "Cuantificación de Proteínas"

Nuestro equipo tuvo el particular problema de la falta de caseína, por diversas razones ya expuestas antes en la práctica anterior, debido a esta situación, no pudimos realizar la primera parte que consistía en preparar la solución de caseína con NaCl y NaOh al 1% y 1 N respectivamente.

Este problema fue grave, pero se resolvió gracias a los compañeros del equipo 1, que nos proporcionó parte de su solución, lo cual cuando medimos en el espectrofotómetro resultó interesante, pues nuestros datos estaban siendo bastante cercanos a lo correcto a diferencia de los compañeros que nos proporcionaron la solución ya que obtenían resultados negativos lo cual era incorrecto y por lo tanto, pensaron que la solución de caseína no había sido preparada adecuadamente, pero, se desecho esta idea cuando observaron nuestros datos, entonces el haber obtenido parte de su solución puede decirse que fue una clase de beneficio mutuo.

En cuanto a la práctica de cuantificación de caseína y el método de Biuret empleado nos dice que el reactivo Biuret forma complejos de color violeta, esto lo comprobamos cuando nuestros diez tubos de ensaye que contenían la caseína comenzaron a tornarse de ese color.

La solución del tubo de ensaye número uno, fue nuestra solución patrón pues contenía albúmina en una concentración que conocíamos y que posteriormente nos permitió obtener los cálculos para la regresión lineal, que como bien se observa fue bastante próxima nuestra curva patrón.

Los resultados de esta práctica puede decirse que fueron satisfactorios comparado a la prática anterior.

Equipo 3 Precipitación Isoeléctrica

Bueno durante la práctica tuvimos problemas ya que nuestro potenciómetro no estaba bien calibrado y tuvimos que hacer uso de otro potenciómetro, además de eso nuestra solución de leche no se precipito lo suficiente como para obtener más caseína. Durante los centrifugados no hubo problema para equilibrar los tubos, a excepción de que una centrifuga se descalibró y eso hizo que perdiéramos tiempo permitiendonos hacer solo 2 centrifugados en la primera sesión, durante los lavados no hubo problemas y en los agitados contábamos con la ayuda del vórtex para unir a la caseína con el solvente.

Durante la segunda sesión de esta práctica realizamos el centrifugado que nos faltaba, a pesar de que la centrifuga estaba desbalanceada, el profesor nos prestó otra. Durante el proceso con etanol no hubo problemas, lo único malo es que teníamos una cantidad muy pobre de caseína y nuestro resultado fue ese, una cantidad muy pequeña de caseína después del secado.

Nuestros problemas fueron que en primer lugar no dejamos que se precipitara suficiente, en segundo lugar es que se cayó muestra en diversas ocasiones (por se cayó nos referimos a… “se le cayó al profesor”) de ahí en fuera no hubo problemas en el resto de la práctica pero los resultados no fueron satisfactorios al 100% pero si hubo obtención de caseína lo cual era el punto de la práctica.